1.調(diào)查對象:2005年8一9月選擇溫泉池在30個以上的北京市昌平區(qū)內(nèi)昌平鎮(zhèn)北溫泉度假村(昌平北)、昌平鎮(zhèn)西溫泉旅游公司(昌平西)、昌平東部溫泉度假娛樂山莊(昌平東1)、昌平東部溫泉娛樂宮(昌平東2)4所溫泉度假娛樂場所作為調(diào)查對象。

 

  2.調(diào)查方法與內(nèi)容:經(jīng)過培訓(xùn)的調(diào)查人員按調(diào)查表內(nèi)容進(jìn)行開業(yè)年限、溫泉水加熱、過濾、消毒方式、消毒劑的使用情況、環(huán)境條件、溫泉水循環(huán)方式、補(bǔ)換新水及溫泉的不同形式進(jìn)行現(xiàn)場調(diào)查,同時用計量檢定所檢定合格的溫度計、酸度計測量水溫和pH值,用余氯比色計測定余氯。樣品用無菌采水瓶采集出井后儲罐水8份、低溫池(34一39℃)水42份、高溫池(40一47℃)水37份共87份,進(jìn)行軍團(tuán)菌分離、鑒定和菌落計數(shù)。

 

  3.檢測方法:取300ml溫泉水用過濾膜過濾后30ml蒸餾水洗脫,按照1:1比例進(jìn)行酸處理,取處理液各0.1ml分別涂布在2個GVPC平板,放COZ溫箱37℃培養(yǎng)7d,每天觀察菌落生長情況,挑取可疑軍團(tuán)菌的菌落轉(zhuǎn)種在BCYE平板進(jìn)行分純培養(yǎng)和血平板進(jìn)行鑒別培養(yǎng),血平板不生長而BCYE平板生長,用分型血清進(jìn)行軍團(tuán)菌分型,另外計數(shù)2個GVPC平板的菌落取均值,計算出軍團(tuán)菌的濃度(CFU/ml),最后用PCR方法鑒定嗜肺軍團(tuán)菌或非嗜肺軍團(tuán)菌。

 

  4.菌株分離:軍團(tuán)菌分離用GVPC和BCYE培養(yǎng)基購于北京路橋技術(shù)有限責(zé)任公司;標(biāo)準(zhǔn)菌株來源于北京市疾病預(yù)防控制中心;軍團(tuán)菌分型血清(1一14型)來自中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所。

 

  結(jié)果

 

  對象與方法

 

  1.調(diào)查對象:2005年8一9月選擇溫泉池在30

 

  個以上的北京市昌平區(qū)內(nèi)昌平鎮(zhèn)北溫泉度假村(昌平北)、昌平鎮(zhèn)西溫泉旅游公司(昌平西)、昌平東部溫泉度假娛樂山莊(昌平東1)、昌平東部溫泉娛樂宮(昌平東2)4所溫泉度假娛樂場所作為調(diào)查對象。

 

  2.調(diào)查方法與內(nèi)容:經(jīng)過培訓(xùn)的調(diào)查人員按調(diào)

 

  查表內(nèi)容進(jìn)行開業(yè)年限、溫泉水加熱、過濾、消毒方式、消毒劑的使用情況、環(huán)境條件、溫泉水循環(huán)方式、補(bǔ)換新水及溫泉的不同形式進(jìn)行現(xiàn)場調(diào)查,同時用計量檢定所檢定合格的溫度計、酸度計測量水溫和pH值,用余氯比色計測定余氯。樣品用無菌采水瓶采集出井后儲罐水8份、低溫池(34一39℃)水42份、高溫池(40一47℃)水37份共87份,進(jìn)行軍團(tuán)菌分離、鑒定和菌落計數(shù)。

 

  3.檢測方法:取300ml溫泉水用過濾膜過濾后30ml蒸餾水洗脫,按照1:1比例進(jìn)行酸處理,取處理液各0.1ml分別涂布在2個GVPC平板,放COZ溫箱37℃培養(yǎng)7d,每天觀察菌落生長情況,挑取可疑軍團(tuán)菌的菌落轉(zhuǎn)種在BCYE平板進(jìn)行分純培養(yǎng)和血平板進(jìn)行鑒別培養(yǎng),血平板不生長而BCYE平板生長,用分型血清進(jìn)行軍團(tuán)菌分型,另外計數(shù)2個GVPC平板的菌落取均值,計算出軍團(tuán)菌的濃度(CFU/ml),最后用PCR方法鑒定嗜肺軍團(tuán)菌或非嗜肺軍團(tuán)菌。

 

  4.菌株分離:軍團(tuán)菌分離用GVPC和BCYE培養(yǎng)基購于北京路橋技術(shù)有限責(zé)任公司;標(biāo)準(zhǔn)菌株來源于北京市疾病預(yù)防控制中心;軍團(tuán)菌分型血清(1一14型)來自中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所。miP基因特異性引物L(fēng)pmip一15幾GCAATGTCAACAGCAA一3’;LpmiP一25‘一CATAGCGTCTTGCATG一3’參照文獻(xiàn)「l,2〕,PCR試劑TaqDNApolymerase購自華美公司。

 

  1.軍團(tuán)菌檢出情況及血清分型:87份溫泉水檢

 

  出47株軍團(tuán)菌,檢出率為54.02%。其中昌平北一所溫泉度假村檢出率最高為84.38%;昌平西一所溫泉旅游公司檢出率為48.00%;昌平東兩所溫泉度假娛樂場所檢出率分別為37.50%和14.29%。4所溫泉度假娛樂場所儲罐內(nèi)溫泉水未檢出軍團(tuán)菌。47株軍團(tuán)菌用miP基因進(jìn)行嗜肺軍團(tuán)菌(LegionellapneomoPhila,Lp)及非嗜肺軍團(tuán)菌分型,全部為Lp。

 

  血清分型分出4個型別:Lpl、Lps、Lp6、Lp12。其中最多為Lpl占57.45%,Lp6占21.28%,Lp12占89%,Lps占6.38%。

 

  2.溫泉不同區(qū)域的軍團(tuán)菌菌落計數(shù):溫泉池的溫泉水軍團(tuán)菌菌落數(shù)毛10CFU/ml的有n份,高低溫泉池分別為6、5份;20份n一100CFUZml高低溫泉池水分別為6、14份;>100CFU/ml的有16份中高溫池7份,低溫池9份。

 

  3.Lp血清型別與水溫度關(guān)系:4所溫泉度假娛

 

  樂場所溫泉水溫在26一47℃之間。其中低溫池42份水樣檢出Lp26株,檢出率為61.90%;高溫池37份水樣檢出Lp21株,檢出率56.75%;經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理(丫=0.22,尸>0.05),高溫池與低溫池Lp檢出率的差異無統(tǒng)計學(xué)意義;儲罐內(nèi)水溫在26一40℃之間共8份水樣,均未檢出軍團(tuán)菌。檢出的47株Lp,其中27株Lpl型的溫度范圍在34一44℃;10株Lp6型的溫度范圍在38一44℃;Lps型在39℃檢出1株,44℃時檢出2株;Lp12型的溫度范圍36一42℃。34℃以下和44℃以上都未檢出Lp。

 

  4.影響因素與軍團(tuán)菌的關(guān)系:影響因素包括娛樂場所開業(yè)時間、溫泉水pH值、環(huán)境條件、溫泉水加熱方式以及消毒方式。4所溫泉度假娛樂場所開業(yè)時間最短2年,最長10年。昌平北溫泉度假娛樂場所開業(yè)4年,軍團(tuán)菌檢出率高達(dá)84.38%,菌落計數(shù)>100CFU/ml有n份;開業(yè)10年的昌平東2溫泉度假娛樂場所軍團(tuán)菌檢出率較低(14.29%),菌落計數(shù)為零。溫泉水pH值6.4一7.3,環(huán)境溫度26一28℃,但相對濕度比較大均在56%以上。電加熱是溫泉水保持溫度主要方式,鍋爐燒蒸汽加熱只有一家。溫泉場所的消毒全部采用氯制劑,有余氯檢測記錄,采樣時現(xiàn)場測定3家場所余氯含量均在0.3一0.5mg/L之間,但加氯制劑的方式不一樣,用氯制劑刷池而沒有進(jìn)一步做溫泉水消毒的溫泉度假娛樂場所軍團(tuán)菌檢出率高,軍團(tuán)菌菌落計數(shù)也高;而一家用鍋爐燒蒸汽加熱余氯含量0.5mg/I曰,其檢出率低。